塞内卡病毒CH/ZZ/2016株cDNA感染性克隆的构建

作者：韩宇; 王秀明; 刘建奇; 刘亭岐; 乌吉斯古楞; 张斌; 宋庆庆; 关平原

来源：中国动物传染病学报, 2021, 1-9.

• 塞内卡病毒
• 全长cDNA
• 转染
• 病毒拯救

为构建塞内卡病毒（Senecavirus A）CH/ZZ/2016株的感染性克隆，采用RT-PCR技术分3个cDNA片段对SVA/CH/ZZ/2016株全基因组进行扩增，并克隆至pcDNA3.1（+）真核表达质粒中。获得重组质粒pSVA-CH/ZZ经NheI、KpnI酶切及测序鉴定后，转染BHK-21细胞并转至PK-15细胞上进行盲传，直至出现细胞病变（CPE）。对出现CPE的细胞上清进行RT-PCR扩增、酶切、测序、间接免疫荧光试验鉴定。结果显示，成功构建了含SVA全长cDNA克隆的重组质粒，转染BHK-21细胞经PK-15细胞盲传至F5代出现SVA的典型CPE。细胞上清经RT-PCR扩增、酶切、测序结果表明拯救病毒含有不同于亲本病毒的分子标记。间接免疫荧光试验进一步表明拯救了SVA病毒。病毒蚀斑形成和生长曲线表明，拯救毒株和亲本毒株的复制能力及增殖特性相似。本研究构建的CH/ZZ/2016株感染性克隆为进一步研究SVA的致病机理、基因功能及疫苗的研发奠定基础。

• 单位
  农业部; 内蒙古农业大学; 金宇保灵生物药品有限公司