荧光定量PCR精确检测人胚胎干细胞线粒体DNA拷贝数方法的建立

作者：孙懿; 曾思聪; 胡亮; 卢光琇; 林戈

来源：中国细胞生物学学报, 2012, 34(07): 685-689.

• 人胚胎干细胞
• 线粒体DNA
• DNA拷贝数

建立一种精确定量人胚胎干细胞线粒体DNA拷贝数的方法。构建包含线粒体DNAND1和核单拷贝基因β-globin基因序列的重组质粒作为标准品;收集无饲养层培养体系下人胚胎干细胞DNA样本,结合2个单独的Taqman探针实时荧光定量PCR对待测样本中线粒体ND1和核β-globin基因分别进行定量,从而对人胚胎干细胞线粒体DNA的含量进行了精确定量。结果提示,人胚胎干细胞线粒体DNA的平均拷贝数/细胞为1 321±228。研究表明,该技术可对人胚胎干细胞线粒体DNA拷贝数进行准确的测定,为研究培养条件对人胚胎干细胞线粒体DNA拷贝数的影响及优化体外培养条件奠定了基础。

• 单位
  中南大学; 人类干细胞国家工程研究中心; 生殖与干细胞工程研究所