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摘要
目的:利用荧光定量PCR技术,建立霍乱弧菌快速敏感特异的检测方法。方法:以霍乱弧菌CT基因作为靶序列,设计一对引物和探针,以霍乱弧菌菌株提取核酸DNA作为模板,优化引物和探针的浓度比和Mg2+浓度,同时验证方法的特异性、敏感性和重复性。结果:本方法建立的反应体系在引物和探针的浓度为0.6μmol/L、0.6μmol/L,Mg2+浓度为3.5 mmol/L时,具有良好的特异性和敏感性,与副溶性血性弧菌等7种相关细菌均无交叉反应。在纯菌条件下,检测灵敏度21 cfu/ml。稳定性分析表明,同一样品重复检测3次Ct值的变异系数均小于5%。检测水源和海产品结果表明该方法较传统方法敏感、快速、简便。结论...
