2种酮化合物诱导HepG2细胞发生细胞自噬研究

作者：王禹璇; 刘海英; 任晋宏; 张华凤; 薛慧清^*

来源：中国中药杂志, 2020, 45(09): 2151-2157.

DOI：10.19540/j.cnki.cjcmm.20200119.402

• 椭圆叶花锚
• 中药成分
• ■酮
• 细胞自噬
• RNA-seq

探究2种■酮化合物1-羟基-2,3,4,8-四甲氧基■酮(简称Fr15)和1-羟基-2,3,4,6-四甲氧基■酮(简称Fr17)对肝癌细胞HepG2的增殖抑制作用,结合转录组学进一步研究其增殖抑制的作用机制。通过细胞计数法检测2种■酮化合物Fr15和Fr17(0,0.03,0.15,0.3 mmoL·L-1)对HepG2细胞增殖的影响;流式细胞仪检测2种化合物对HepG2细胞周期的影响;荧光显微镜观察细胞中自噬体形成的数量变化;Western blot法检测细胞中自噬标志性蛋白SQSTM 1(p62)及微管相关蛋白1轻链3Ⅰ/Ⅱ(LC3Ⅰ/Ⅱ)的表达情况;对照组与实验组通过RNA-seq转录组学测序技术,分析差异表达基因;qRT-PCR法验证测序差异表达基因对比结果。结果发现细胞经化合物Fr15和Fr17处理后,随着药物浓度和时间的增加HepG2细胞的增殖受到了抑制,流式细胞仪检测发现化合物Fr15和Fr17对HepG2细胞周期影响不大。荧光显微镜表明随着化合物Fr15和Fr17浓度的增加,细胞中自噬体数量逐渐变多。Western blot结果表明加药后的细胞p62蛋白表达下降,同时LC3Ⅱ蛋白表达明显升高。RNA测序结果分析Fr15和Fr17,分别得到26 102个及52 351个差异表达基因。KEGG分析发现化合物处理后对细胞自噬信号通路影响较大。qRT-PCR验证6个与自噬相关的表达上调基因,其变化趋势与测序结果一致,6个基因均出现上调趋势。2种■酮化合物Fr15和Fr17可能通过诱导HepG2细胞发生细胞自噬来抑制其增殖。

• 单位
  山西中医药大学; 生命科学学院; 中国科学技术大学