miRNA-139-5p通过靶向调控CXCR4/CXCL12信号通路逆转非小细胞肺癌A549细胞顺铂耐药

作者：陈家亮; 周向东^*; 刘畅; 李琪; 黄华萍; 韩忠; 陈小妹

来源：现代肿瘤医学, 2023, 31(08): 1379-1385.

• miR-139-5p
• 非小细胞肺癌
• CXCR4/CXCL12信号通路
• 顺铂耐药

目的:探讨miRNA-139-5p对非小细胞肺癌A549细胞顺铂(cisplatin, DDP)耐药的影响，及其可能的分子机制。方法:采用DDP浓度递增法诱导A549细胞建立DDP耐药细胞株A549/DDP,将miR-139-5p mimics、无义序列(mimics-NC)、CXCR4过表达质粒(pcDNA3.1-CXCR4)、pcDNA3.1空载质粒(Vector)转染至A549/DDP细胞中，将细胞分为mimics-NC组(转染无义序列)、mimics组(转染miR-139-5p mimics)、mimics+Vector组(共转染miR-139-5p mimics和空载质粒)和mimics+CXCR4组(共转染miR-139-5p mimics和CXCR4过表达质粒),另设置空白对照组(blank)。不同浓度DDP处理，MTT法检测细胞增殖活性，并计算IC50值和耐药指数(resistance index, RI);qRT-PCR法检测细胞中miR-139-5p和CXCR4 mRNA表达水平；流式细胞术检测细胞凋亡率；Western blot法检测细胞中耐药相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)及CXCR4/CXCL12信号通路相关蛋白表达水平；双荧光素酶报告基因实验验证miR-139-5p与CXCR4的靶向关系。结果:不同浓度DDP处理24 h后，耐药株A549/DDP及其亲本A549细胞IC50值分别为(208.87±27.89)μmol/L和(31.66±6.30)μmol/L,RI=6.59。与亲本A549细胞比较，耐药株A549/DDP中miR-139-5p的表达水平明显降低(P<0.05),而CXCR4 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与mimics-NC组比较，mimics组A549/DDP细胞增殖活性明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),细胞中CXCR4 mRNA和蛋白以及P-gp、MRP1、PI3K(p110α)和p-AKT/AKT等蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与mimics+Vector组比较，mimics+CXCR4组A549/DDP细胞增殖活性显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05),而细胞中CXCR4、P-gp、MRP1、PI3K(p110α)和p-AKT等蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实，miR-139-5p靶向负调控CXCR4表达。结论:miRNA-139-5p通过靶向下调CXCR4表达，提高非小细胞肺癌DDP耐药细胞株A549/DDP对DDP的药物敏感性。

• 单位
  中国医学科学院; 海南医学院第一附属医院