鼻咽癌CNE2细胞生物钟基因Per1表达及其对生物学行为影响的研究

作者：周湾; 罗盼; 曾艳; 陈宇; 唐红; 龙金华; 罗秀玲; 金风; 吴伟莉^*

来源：中华肿瘤防治杂志, 2022, 29(11): 800-808.

DOI：10.16073/j.cnki.cjcpt.2022.11.04

• 鼻咽癌
• CNE2细胞
• Per1基因
• 增殖
• 凋亡
• 侵袭

目的 研究Per1对鼻咽癌CNE2细胞增殖、凋亡、侵袭及细胞周期分布的影响，初步探讨Per1在鼻咽癌中可能扮演的角色。方法 通过实时荧光定量PCR法及蛋白质印迹法检测低分化鼻咽癌细胞CNE2及正常鼻咽上皮细胞NP69中核心生物钟基因Per1 mRNA及蛋白的表达；采用基因过表达及干扰技术将实验分为过表达组(Per1-oe)、过表达对照组(Per1-oeNC)、干扰组(Per1-shRNA-646)、干扰对照组(CNE2)和空载体组(control-shRNA);采用CCK8测定Per1-shRNA、control-shRNA和CNE2组细胞增殖能力；采用流式细胞仪分析Per1对CNE2细胞周期分布的影响；采用Transwell小室及细胞划痕实验验证过表达和低表达各组细胞的迁移及侵袭能力。结果 CNE2细胞Per1 mRNA表达量为0.002±0.001,低于NP69细胞的1.000±0.001,t=4771.56,P<0.05;CNE2细胞Per1蛋白表达为0.60±0.15,低于NP69细胞的0.90±0.26,t=4.267,P<0.05。流式细胞分析显示，CNE2、control-shRNA和Per1-shRNA组S期比例分别为(36.54±0.19)%、(36.18±0.69)%和(44.31±0.36)%(F=323.423,P<0.001),G1期比例分别为(52.88±1.27)%、(53.72±0.51)%和(37.68±0.62)%(F=55.356,P<0.001),G2/M期比例分别为(10.58±1.21)%、(10.10±0.88)%和(18.00±0.98)%,F=296.47,P<0.001。CCK8实验检测0～5 d的光密度值，CNE2、control-shRNA和Per1-shRNA组差异有统计学意义，F=10.63,P<0.001;两两比较显示，Per1-shRNA组高于CNE2和control-shRNA组，均P<0.05。细胞划痕实验显示，CNE2、control-shRNA和Per1-shRNA组24 h迁移率分别为(15.02±0.57)%、(14.46±1.08)%和(21.55±0.52)%,F=66.241,P<0.001;干扰Per1使细胞迁移率增高，Per1-oe组24 h迁移率(7.00±1.59)%低于Per1-oeNC组(14.00±2.36)%(t=3.394,P<0.05),Per1-oe组48 h迁移率(18.00±2.01)%低于Per1-oeNC组(25.00±3.04)%,t=4.292,P<0.05。Transwell实验显示，CNE-2、control-shRNA和Per1-shRNA组穿膜细胞数分别为64.00±1.73、62.00±2.08和90.00±1.00,F=256.447,P<0.001;Per1-oe组细胞数(109.00±3.10)低于Per1-oeNC组(168.00±2.00),t=6.804,P<0.05。结论 核心生物钟基因Per1在鼻咽癌细胞CNE2中可能扮演抑癌基因的角色，对癌细胞增殖甚至迁移、侵袭能力具有一定的抑制作用。

• 单位
  贵州医科大学