TAT-MC4R1的表达纯化及其减重作用

作者：李俊良; 李健; 王中山; 张梦^*

来源：生物技术, 2023, 33(04): 403-407.

DOI：10.16519/j.cnki.1004-311x.2023.04.0060

• TAT-MC4R1
• 减重
• 多肽
• 蛋白表达

[目的]体外表达并获得有活性的TAT-MC4R1,探讨其减重作用。[方法]PCR法克隆MC4R羧基末端序列并构建pWaldo-MC4R1质粒，转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),优化表达温度和诱导剂IPTG浓度；利用镍柱亲和层析与分子筛层析方法纯化得到TAT-MC4R1蛋白质；构建小鼠模型，检测TAT-MC4R1对小鼠体重的影响。[结果]成功构建pWaldo-MC4R1表达载体，0.1 mmol/L IPTG、25℃诱导培养20 h,蛋白质以可溶形式高效表达；动物模型证实TAT-MC4R1能够安全有效减重。[结论]以0.1 mmol/L IPTG于25℃诱导培养20 h,每1 L细胞培养基可获得约1.2 mg的TAT-MC4R1蛋白，蛋白纯度超过90%。最终获得的TAT-MC4R1能够安全有效减轻小鼠体重。

• 单位
  徐州医科大学; 连云港市妇幼保健院; 徐州市中心医院