启动子探针载体的构建及橡胶树白粉菌启动子筛选鉴定

作者：徐良向; 刘耀; 廖小淼; 王义; M.J.N.Rajaofera; 何其光; 刘文波; 林春花; 缪卫国^*

来源：生物技术通报, 2019, 35(01): 51-57.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0584

• 橡胶树白粉菌
• 启动子
• 探针载体

旨在构建适于快速检测橡胶树白粉病菌(Oidium heveae)HO-73启动子的探针载体。以卡那霉素抗性基因Kan作为报告基因,在pUC19骨架载体,构建获得启动子探针载体pUC19-K,连入CaMV35S启动子做启动子探针载体功能验证;利用启动子探针载体pUC19-K对预测的启动子片段LY1、LY2、LY3、LY4进行筛选鉴定。将CaMV35S启动子连入到启动子探针载体中,得到可检测启动子活性的启动子探针载体pUC19-K;应用生物信息学软件对部分橡胶树白粉菌HO-73全基因组数据预测,得到4个理论上具有活性的启动子序列LY1、LY2、LY3、LY4,利用构建的启动子活性探针载体进行活性比较,卡那耐受性实验检测发现含LY2和LY3的菌株随卡那霉素浓度的升高耐受性更强,最终得到2个活性较强的启动子LY2和LY3。以上结果表明,构建的启动子活性探针载体可以有效、灵敏地用于HO-73强启动子的筛选和启动子活性检测。

• 单位
  海南大学