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摘要
为建立一种快速检测金黄色葡萄球菌(S.aureus)的新型可视化方法，本研究以S.aureus耐热核酸酶基因(nuc)为靶序列设计特异性引物，对其反应条件进行优化，建立聚合酶交联螺旋反应(PCLSR)可视化检测方法，结果显示，PCLSR法在反应温度62℃，孵育时间60 min、dNTPs浓度为3.0 mmol/L、Bst-DNA聚合酶浓度为10 U/管时扩增效果最佳。提取14株金黄色葡萄球菌和9株非金黄色葡萄球菌基因组为模板，利用该方法进行特异性试验，结果显示，PCLSR法能有效检测到14株S.aureus，而对其他9株非S.aureus检测结果均为阴性，特异性良好。10倍倍比稀释S.aureus菌液(1×107cfu/m L～1×100cfu/m L)后提取基因组作为模板，进行敏感性试验，结果显示，PCLSR法与荧光定量PCR法具有相同的敏感性，检测下限均达到1×102cfu/m L，而环介导等温扩增(LAMP)敏感性为1×103cfu/m L，可见该PCLSR敏感性较高。利用该PCLSR、LAMP、细菌培养法和荧光定量PCR法同时检测46份人工污染的生猪肉、灭菌纯牛奶样品中金黄色葡萄球菌，以评价该方法的检测性能，结果显示，PCLSR与荧光定量PCR检测结果与样品符合率为100%，而细菌培养法和LAMP法与样品的符合率仅均为91.67%，可见该PCLSR可以用于临床样品的检测。本研究为动物疾病预防和食品卫生检验等领域快速检测S.aureus提供了新型检测方法。
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