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摘要
目的：采用shRNA转染构建干扰ALDH1A1表达的宫颈癌HeLa细胞，以利进一步探讨ALDH-1与宫颈癌细胞的生物学特性之间的关系。方法：体外培养宫颈癌HeLa细胞，加入梯度浓度G418溶液进行筛选，确定最佳筛选浓度；取对数生长期细胞，采用Lipofectamine 2000脂质体将4种干扰重组质粒（ALDH1A1-1719、ALDH1A1-574、ALDH1A1-740、ALDH1A1-921，其中有一种具最佳干扰效果）及1种阴性对照质粒（shNC）转染宫颈癌HeLa细胞。5种重组质粒与Lipo2000的比例均为0.2 μg:1 μL，空白对照组中仅加入Lipofectamine 2000脂质体。6 h后换液，24h后荧光显微镜下观察荧光表达情况。结果：确定G418的最佳筛选浓度为400 mg/L；5种重组质粒均成功转染入HeLa细胞中。其中ALDH1A1-1719的转染效率为4.67%；ALDH1A1-574的转染效率为1.16%；ALDH1A1-740的转染效率为12.45%；ALDH1A1-921的转染效率为3.42%；shNC组的转染效率为1.02%。结论：干扰ALDH1A1表达的shRNA载体转染宫颈腺癌HeLa细胞成功可行且效果好。
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