没药甾酮通过调控mTOR/自噬通路增强替莫唑胺抗脑胶质瘤的作用研究

作者：余卓伦; 张其海; 樊昊雯; 潘晶; 徐宏彬^*

来源：中药材, 2023, 46(02): 462-468.

DOI：10.13863/j.issn1001-4454.2023.02.033

• 没药甾酮
• 替莫唑胺
• 脑胶质瘤
• mTOR
• 自噬
• 机制

目的：探讨没药甾酮增强化疗药物替莫唑胺抗脑胶质瘤的作用及其分子机制。方法：用没药甾酮、替莫唑胺单药及其联合处理U251细胞后，采用平板克隆形成实验、5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)实验检测各组细胞增殖能力；采用Transwell小室实验、划痕愈合实验检测各组细胞侵袭、迁移能力；采用Western Blot检测细胞中mTOR/自噬通路关键蛋白的表达水平。结果：低氧条件下(200μmol/L的CoCl2诱导48 h),没药甾酮单药(10、30、100μmol/L)和替莫唑胺单药(6.25、12.5、25μmol/L)能显著抑制U251细胞克隆形成数(P<0.001);与替莫唑胺单药组(6.25、12.5μmol/L)比较，没药甾酮(10μmol/L)联合替莫唑胺(6.25、12.5μmol/L)抑制U251细胞克隆形成的作用增强，但差异无统计学意义(P>0.05)。没药甾酮单药(10、30、100μmol/L)和替莫唑胺单药(100、200、400μmol/L)显著下调了U251细胞EdU阳性细胞率；与替莫唑胺单药组(200、400μmol/L)比较，没药甾酮(30、100μmol/L)联合替莫唑胺(200、400μmol/L)显著下调了U251细胞EdU阳性细胞率(P<0.05或P<0.01)。与替莫唑胺单药(400μmol/L)比较，联用没药甾酮(30μmol/L)显著抑制U251细胞迁移、侵袭能力(P<0.001)。与替莫唑胺单药(400μmol/L)比较，联用没药甾酮(30μmol/L)显著下调U251细胞中Phospho-mTOR(Ser2448)、Phospho-4E-BP1(Ser65)蛋白表达，显著上调MAPKAP1、 p-P70(S6K)蛋白表达(P<0.05或P<0.01),对mTOR、Phospho-mTOR(Ser2481)、Rictor、Raptor、GβL表达的下调也有一定的增强作用，但差异无统计学意义。与替莫唑胺单药(400μmol/L)比较，联用没药甾酮(30μmol/L)显著上调U251细胞中自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、P62的表达(P<0.05～P<0.001),对Atg12-5/free-Atg12也有上调作用，但差异无统计学意义。结论：没药甾酮可通过调控mTOR/自噬信号通路增强替莫唑胺抗脑胶质瘤作用。

• 单位
  南京中医药大学