中性红褪色光度法测定白菜中过氧化氢酶活性

作者：武洋; 董娜; 张爱菊; 张小林^*

来源：理化检验. B, 化学分册, 2020, 56(06): 682-685.

• 中性红
• 褪色光度法
• 过氧化氢酶
• 活性
• 白菜

建立了一种中性红(NR)褪色光度法测定过氧化氢酶(CAT)活性的方法。称取20g本地大白菜样品,研碎,用磷酸盐缓冲溶液(pH 7.0)定容至1 000.0mL,取稀释液1.00mL于50mL容量瓶中,再加入1mmol·L-1 H2O2基质溶液5.00mL,在25℃下进行酶催化反应15min后,立即加入0.01mol·L-1酸性Fe3+溶液(内含0.02mol·L-1 H2SO4溶液)1.00mL用于终止酶促反应(H2SO4)和催化褪色反应(Fe3+),再加入5×10-4mol·L-1 NR溶液3.00mL,摇匀,在80℃水浴中进行褪色反应,25min后加水定容。取适量样品溶液于1cm比色皿中,以水为参比,于波长528nm处测量其吸光度A。同时完成空白试验吸光度A0测定,根据吸光度的变化ΔA(ΔA=A0-A)确定CAT的活性(E)。结果表明:在10min内,酶促反应符合一级动力学反应的特征,CAT活性E在0.3U·mL-1内与ΔA呈线性关系,检出限(3S/N)为0.006 8U·mL-1。对大白菜的叶、茎、根进行加标回收试验,CAT的含量依次为6.25,9.00,8.00U·g-1,回收率均为104%,测定值的相对标准偏差(n=6)为1.7%～3.4%。将大白菜茎部自然放置4d后,CAT活性降至最初的30%。

• 单位
  甘肃医学院