基于RT-PCR法构建新型冠状病毒滴度对应核酸拷贝数的标准曲线

作者：刘小可; 但德苗; 杜洪桥; 卢佳^*; 李新国^*

来源：中国病毒病杂志, 2023, 13(03): 207-212.

DOI：10.16505/j.2095-0136.2023.3009

• 新型冠状病毒
• 核酸拷贝数
• 滴度
• 标准曲线

目的 获得反转录-聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR）检测的新型冠状病毒滴度与核酸拷贝数的对应关系，以提高检测效率。方法 通过RT-PCR法用新型冠状病毒标准品构建循环阈值（CT值）对应核酸拷贝数的标准曲线。按照感染复数（MOI）=0.000 1分别接种新型冠状病毒原型株、南非（beta）株、印度（delta）株和奥密克戎株至T75细胞瓶中培养72 h，收获液梯度稀释后利用终点稀释法测定活病毒滴度，清除收获液中残余RNA后，检测各梯度对应病毒核酸拷贝数。结果 利用核酸标准物质构建了基于N基因的标准曲线为Y=―3.289X+36.86，基于ORF基因的标准曲线为Y=―3.177X+35.77。残余RNA清除实验结果显示RNase A的加入对于病毒液样品影响显著。对4型别新型冠状病毒收获液检测滴度和拷贝数后，获得原型株基于N基因的滴度对应拷贝数标准曲线为Y=1.039X+3.422,ORF基因为Y=0.991 7X+3.209;beta株N基因标准曲线为Y=1.071X+3.316,ORF基因为Y=1.031X+3.447;delta株N基因标准曲线为Y=1.138X+3.410,ORF基因为Y=1.115X+2.991;omicron株N基因标准曲线为Y=1.062X+4.493,ORF基因为Y=1.007X+4.271。结论 本研究构建了病毒滴度对应核酸拷贝数的标准曲线，并且具有良好的相关性。相较于常规滴度测定法，本研究建立的新方法极大提高了检测效率和数据准确性，为新型冠状病毒相关实验和数据处理分析提供新的思路与方法。

• 单位
  武汉生物制品研究所有限责任公司