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摘要
目的构建携带Math1基因的重组慢病毒载体,检测其滴度,检测其在293T细胞中的表达。方法 PCR扩增Math1基因,将其连入慢病毒载体pLenti-GFP中;在感受态细胞DH5α中培养扩增,并行Math1基因的测序鉴定;将重组的慢病毒四质粒共转染293T细胞,收获并浓缩病毒;感染293T细胞和提取细胞DNA后用实时定量PCR法检测病毒滴度。用逆转录PCR和Western blot法检测Math1基因在感染病毒的293T细胞中的表达。结果构建的慢病毒载体pLenti-Math1-GFP经测序分析证实基因序列正确。四质粒共转染293T细胞后,荧光显微镜下可见大量绿色荧光。包装后慢病毒测定滴度约为3×1011Tu/L。逆转录PCR和Western blot法均能检测Math1基因在感染病毒的293T细胞中的表达。结论成功构建携带Math1基因的重组慢病毒,并能在293T细胞中表达。
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单位华中科技大学同济医学院附属同济医院; 浙江大学医学院附属第一医院; 老河口市妇幼保健院
