科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的应用pET表达系统原核表达红色荧光蛋白变种mCherry,分析重组mCherry表达与荧光变化的关系,为其纯化及作为原核报告系统应用提供依据。方法根据GenBank中收录的mCherry氨基酸序列合成其编码基因,构建pET-mCherry表达质粒,转化入大肠埃希菌BL21(DE3)表达宿主。在不同诱导时间点,考察菌株荧光强度、mCherry表达量、培养上清液mCherry泄漏情况。诱导10 h后提取重组mCherry,利用荧光强度估算提取收率,并通过凝胶电泳分析提取液的蛋白纯度。结果成功构建pET-mCherry表达载体,并在BL21(DE3)中得到高效诱导表达。荧光检出滞后于mCherry的表达,随诱导时间延长重组mCherry不断泄漏至培养液中。初步提取的重组mCherry纯度达到95%以上。结论应用pET表达系统可高效表达mCherry,过表达mCherry可泄漏至胞外,方便其纯化。mCherry作为原核报告系统应用时,合理的诱导时间可能是关键影响因素。
- 单位
