水体中致病菌富集和核酸提取方法及优化

作者：吴妍; 张晓; 张良; 邢方潇; 张岚^*

来源：中国公共卫生, 2023, 39(11): 1496-1500.

• 致病菌
• 水体
• 核酸提取
• 荧光定量PCR

目的 建立一种灵敏、可靠、快速对水体中致病菌富集和核酸提取的前处理方法，用于水体致病菌荧光定量PCR检测。方法 通过加标准菌株脓肿分枝杆菌、原菌液梯度稀释，采用离心柱法和磁珠法核酸提取试剂盒结合不同滤膜洗脱方式进行核酸提取；采用不同材质、尺寸、数量的击打物质及均质仪循环次数等对核酸提取条件进行优化；所得核酸进行荧光定量PCR检测，比较各方法的提取效率；采用最优提取条件，对加标水样进行荧光定量PCR检测，考察全流程回收率和检出限。结果 采用0.20μm滤膜过滤+7颗大锆珠均质仪循环6次+TIANMicrobe Magnetic Envir-DNA Kit方法回收率最高（81.03%±19.23%），检出限达到6.20 CFU/100 mL。结论 均质仪+TIANMicrobe Magnetic Envir-DNA Kit法更适用于水体中致病菌的富集和核酸提取。

• 单位
  中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所