曼氏无针乌贼神经肽sCAP基因克隆与组织表达定位

作者：李颖; 周宇鑫; 单雨菡; 黄伟^*; 刘慧慧; 平洪领; 史会来; 迟长凤^*

来源：水生生物学报, 2019, 43(04): 778-785.

• 曼氏无针乌贼
• sCAP
• 生物信息学
• 荧光定量PCR
• 原位杂交

为研究曼氏无针乌贼(Sepiella japonica)小心激肽(small cardioactive peptides, sCAP)生理功能,通过RACE技术克隆曼氏无针乌贼sCAP基因(简称SjsCAP, GenBank登录号:MG779491),得到总长度为696 bp的cDNA序列,包括111 bp的5′非编码区(UTR)和324 bp的3′UTR,预测的开放阅读框(ORF)共261 bp,编码86个氨基酸,相对分子量(MW)为9.331 kD,等电点(pI)为8.52。信号肽以及跨膜区预测结果表明, sCAP中含有明显的信号肽序列和跨膜区结构。因此,推测该蛋白可能由细胞内分泌到细胞外发挥作用。亲水性分析显示该蛋白为亲水性蛋白。基于sCAP氨基酸序列进行的系统进化分析表明曼氏无针乌贼与商乌贼(Sepia officinalis)亲缘关系最近,相似性达到90%。通过荧光定量PCR (Quantitative real-time PCR, qRT-PCR)技术对Sjs CAP基因在成熟雄性和雌性曼氏无针乌贼不同组织中的表达量进行分析,结果显示sCAP主要在视叶中显著表达,在脑中也有较高的表达量,其中雄性个体表达量显著高于雌性个体。原位杂交实验结果显示sCAP基因在曼氏无针乌贼的脑组织的视叶、食道上神经团的垂直叶、亚垂直、脑脚叶、背外侧叶和视腺均可以观察到明显的阳性杂交信号。sCAP基因的成功克隆以及组织表达定位分析为sCAP的亚细胞定位以及生物学功能研究奠定一定的基础,同时为曼氏无针乌贼的种质资源保护与开发提供一定的理论支持。

• 单位
  浙江海洋大学; 浙江省海洋水产研究所