解淀粉芽孢杆菌中温α-淀粉酶基因的克隆、表达与酶学性质分析

作者：刘洋; 沈微; 石贵阳; 王正祥

来源：工业微生物, 2009, 39(01): 11-15.

• 解淀粉芽孢杆菌
• 中温α-淀粉酶
• 基因克隆
• 酶学性质

以中温α-淀粉酶生产菌株Bacillus amyloliquefaciens M23基因组DNA为模板,PCR扩增得到了2.0 kb α-淀粉酶基因全长序列。该基因由上游启动子220 bp,结构基因1544 bp和终止序列320 bp构成。将无信号肽的α-淀粉酶结构基因amyQ,克隆入表达载体pET28a,转化E.coli BL21(DE3),经诱导,测定α-淀粉酶活性。结果表明:α-淀粉酶基因amyQ获得了活性表达,酶活力为2.297 U/mL,SDS-PAGE电泳结果显示出分子量约为58 kDa特异性蛋白质条带。酶学性质分析表明,重组α-淀粉酶的最适反应温度为60℃,最适反应pH为6.5,在60℃保温15 min保持85%以上活性,超过15 min,酶迅速失活,在pH 5.5～10.0环境下稳定。水解产物分析表明:淀粉水解终产物主要为麦芽寡糖和糊精和少量葡萄糖。

• 单位
  工业生物技术教育部重点实验室; 生物工程学院; 江南大学