Alcaligenes sp.腈水解酶组成型毕赤酵母表达条件的优化

作者：张新红; 朱富成; 常飞; 徐涛

来源：新余学院学报, 2022, 27(06): 24-30.

• 腈水解酶
• 毕赤酵母
• 发酵优化
• 胞外表达
• R-扁桃酸

以实验室前期构建的组成型胞外表达Alcaligenes sp.腈水解酶重组菌株Pichia pastoris X33/pGAPza-rDNA-NIT为研究对象，对该菌株的发酵培养基进行筛选，以最适发酵培养基为基础，通过对发酵培养基组分和表达条件进行优化，提高腈水解酶的表达量并检测其催化性能。结果表明，甘油培养基d效果最佳，腈水解酶体积酶活可达1.03 U/L,OD600为18.36。经发酵表达条件优化后，在蛋白胨25 g/L、酵母粉10 g/L、甘油20 g/L、MgSO4 1 g/L、磷酸盐20 mmol/L、培养基初始pH 8.0、装液量20%、诱导温度26℃、发酵时间72 h条件下，腈水解酶体积酶活达1.75 U/L,OD600为45.7,分别是优化前的1.7倍和2.5倍。在此基础上，利用腈水解酶进行扁桃腈催化形成R-扁桃酸的进程研究，反应2h产率可达95.1%,e.e.值达100%,此结果可为工业化应用提供参考，可为腈水解酶的研究进一步奠定基础。

• 单位
  皖西学院; 合肥学院