psiRNA-hHDEK的构建及其对CasKi细胞生物学特性影响的研究

作者：刘岿然; 杨雨; 赵敏; 张淑兰

来源：中国医师杂志, 2011, 13(1): 19-22.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1008-1372.2011.01.006

• 癌基因
• 基因沉默
• RNA干扰
• 宫颈肿瘤/病理学
• 细胞增殖
• 细胞凋亡
• 细胞周期

目的 观察DEK基因沉默对宫颈癌CaSki细胞增殖、细胞周期及凋亡、衰老的影响,为探索防治人类宫颈癌的新方法提供依据.方法 根据siRNA设计原则和Cenebank中DEK核苷酸序列,利用软件设计出针对DEK位点的特异性小干扰RNA,克隆至siRNA真核表达载体psiRNAhHlneo中,应用脂质体介导重组质粒转染宫颈癌CaSki细胞株,用RT-PCR和Western blot检测转染后DEK mRNA和蛋白表达,转染后48h MTF法检测细胞增殖、流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期改变、SA-β-半乳糖苷酶细胞化学染色鉴定细胞衰老.结果 转染质粒psiRNA-hHDEK组DEK mRNA及蛋白的表达明显减少(0.28±0.02),DEK基因沉默后CaSki细胞增殖能力下降,细胞周期阻抑,细胞凋亡率增加,衰老细胞增多.结论 成功构建表达DEK siRNA的真核表达质粒psiRNA-hH-DEK,并能够有效沉默CaSki细胞中DEK基因表达.DEK基因沉默后能够诱导CaSki细胞凋亡和细胞衰老.DEK基因在宫颈癌发生和演变中发挥重要作用,其既是衰老抑制基因,又是凋亡抑制基因.

• 单位
  中国医科大学附属盛京医院