泛素连接酶LNX1的表达、活性测定和功能初探

作者：郭正光; 高友鹤

来源：生物技术通讯, 2012, (04): 523-526.

• 泛素连接酶
• 表达
• 酶活性测定
• LNX1
• Kv1.4 ubiquitin ligase
• expression
• enzyme activity determination
• Kv1.4

目的:在大肠杆菌中表达重组人泛素连接酶LNX1,并研究其对钾离子通道蛋白Kv1.4的泛素化作用。方法:构建人LNX1重组蛋白原核表达载体pGEX-LNX1,在大肠杆菌中通过IPTG诱导表达重组蛋白,表达产物经GSTrap FF纯化,并通过体外泛素化(in vitroubiquitination)方法测定其泛素连接酶活性,同样用体外泛素化方法研究其对含有Kv1.4的C端的人工底物的泛素化。结果:获得了纯化的有泛素连接酶活性的重组人LNX1蛋白,重组LNX1可以在体外泛素化体系中泛素化含有Kv1.4的C端的人工底物。结论:重组人LNX1原核表达成功,具有泛素连接酶活性,并催化Kv1.4的泛素化。

• 单位
  医学分子生物学国家重点实验室; 中国医学科学院基础医学研究所