乏氧/辐射双敏感启动子介导分泌型人TRAIL基因对肺腺癌A549细胞周期及增殖的影响

作者：杨艳明; 王志成; 王铁君; 王溪; 曲雅勤

来源：中国老年学杂志, 2009, 29(11): 1376-1378.

DOI：10.3969/j.issn.1005-9202.2009.11.025

• 乏氧/辐射
• 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)
• 增殖
• 周期

目的构建乏氧(HRE)/辐射(Egr1)双敏感启动子介导的分泌型人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)(shTRAIL)基因表达载体pcDNA3.1-HRE-Egr1-shTRAIL,观察其对肺腺癌A549细胞周期及增殖的影响。方法利用化学合成HRE上、下链,PCR扩增得到双链HRE;利用基因重组技术构建含有HRE/Egr1双敏感启动子介导shTRAIL的表达载体pcDNA3.1-HRE-Egr1-shTRAIL,经酶切、PCR和测序鉴定正确后,干扰质粒经脂质体介导转染肺腺癌A549细胞,MTT法检测A549细胞增殖的变化,流式细胞术检测A549细胞周期的变化。结果BamHI和SmaI酶切,所得片段大小分别为1284bp和4998bp、2292bp和3990bp;以载体为模板,Egr1和shTRAIL引物进行PCR扩增,可得到469bp和820bp产物;将pcDNA3.1-HRE-Egr1-shTRAIL进行测序,所得结果与设计一致,说明构建正确。转染肺腺癌A549细胞后,乏氧与辐射能够降低细胞增殖能力,增加G0/G1和S期细胞百分比,降低G2/M期细胞百分比(P<0.05,P<0.01),二者联合作用更明显。结论乏氧/辐射双敏感启动子介导分泌型人TRAIL基因在乏氧和/或辐射条件下能够延长细胞G0/G1和S期,缩短G2/M期,并且抑制肺腺癌A549细胞增殖能力,二者协同作用更明显。

• 单位
  吉林大学; 吉林大学第二医院; 公共卫生学院