产普鲁兰酶菌株的筛选鉴定及普鲁兰酶基因的克隆表达及其性质分析

作者：郭晓敏; 李宁; 唐玉; 路卫卫; 李伟亮; 董宇辰; 陆坚^*; 黄日波

来源：基因组学与应用生物学, 2021, Z3: 3035-3043.

DOI：10.13417/j.gab.040.003035

• 普鲁兰酶
• 筛选鉴定
• 基因克隆
• 重组表达
• 酶学性质

本研究从广西防城港市北仑河口红树林土壤沉积物中筛选到 1 株产普鲁兰酶细菌 GXM-1，利用形态学和 16S rRNA 序列进行分析鉴定，结果表明该菌株为 Bacillus licheniforms；采用同源克隆策略获得了Bacillus licheniforms GXM-1 普鲁兰酶基因(pulM)，在 Escherichia coli BL21 中实现了 pulM 的可溶性表达。纯化普鲁兰酶的比活力为 72.6 U/mg，最适反应温度为 40 ℃，最适 p H 为 6.5,Km=(6.442±0.466 8) mg/mL,Vmax=(89.84±2.795) μmol·min-1·mg-1,40 ℃保温 4 h 相对残余酶活力为 40%，在 pH 7.0～8.0 缓冲液中保存 12 h，相对残余酶活力保持在 80%以上，金属离子 Ca2+、Na+、Li+和 Ni+对 PulM 的酶活力有明显的激活作用。研究结果为普鲁兰酶在工业中的应用研究提供了新的思路。

• 单位
  亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室; 广西大学