农杆菌介导的杜梨叶片瞬时转化方法的建立

作者：李刚; **丽; 王翔; 马青翠; 张海霞; 张玉星^*; 许建锋^*; 亓宝秀^*

来源：果树学报, 2021, 38(11): 2006-2013.

DOI：10.13925/j.cnki.gsxb.20210187

• 杜梨
• 组织培养
• 叶片
• 农杆菌
• 瞬时转化
• β-葡糖醛酸酶

【目的】探寻一种由农杆菌介导的杜梨叶片瞬时转化的最佳方法。【方法】以杜梨组织培养的幼嫩叶片为材料,将含有GUS基因的pBI121植物表达载体转化农杆菌GV3101和EHA105,设计3因子3水平正交试验L9(33),采用不同农杆菌菌液浓度、不同真空渗入时间,侵染叶片组织细胞,取不同时间共培养后的叶片观察GUS染色情况。【结果】GV3101和EHA105均能高效侵染转化杜梨叶片,使GUS蛋白表达,但其转化效率不同。农杆菌GV3101在菌液OD600为0.8,真空渗入20 min,共培养4 d后,杜梨叶片的转化效率即可达到100%,且叶片坏死率仅为13.09%;EHA105在OD600为0.8,真空渗入30 min,共培养6 d,或菌液OD600为1.0,真空渗入10 min,共培养2 d的条件下转化效率最高,均为83.33%,但是,叶片坏死率分别为27.78%和15.26%,然而在菌液OD600为1.0,真空侵染时间20 min,共培养4 d后,叶片转化效率为75.79%,但叶片坏死率大大降低,仅为5.00%。【结论】菌株GV3101和EHA105均能高效侵染转化杜梨叶片,最高转化效率分别为100%和83.33%,所以菌株GV3101转化效率高于EHA105。考虑到叶片坏死率,菌株GV3101瞬时转化杜梨叶片的最适条件为:菌液OD600为0.8,真空渗入时间20 min,共培养4 d,转化效率100%,叶片坏死率13.09%;菌株EHA105瞬时转化杜梨叶片的最适条件为:菌液OD600为1.0,真空渗入20 min,共培养4 d,转化效率75.79%,叶片坏死率5.00%。

• 单位
  河北农业大学