原因不明复发性自然流产患者外周血pDC、miR-6165水平变化及其调控机制

作者：郑象昭; 尹训强; 王东梅; 张云虹; 张振; 魏然; 朱肖肖; 郭强; 周宪宾; 褚楚; 赵霖^*; 李霞^*

来源：山东医药, 2019, 59(02): 18-22.

• 原因不明复发性自然流产
• 微小核糖核酸6165
• 信号传导及转录激活因子3
• 浆细胞样树突状细胞

目的观察原因不明复发性自然流产(URSA)患者外周血中浆细胞样树突状细胞(pDC)、微小RNA-6165(miR-6165)水平变化,并探讨二者间的调控机制。方法选取正常早孕妇女(正常妊娠组)和URSA患者(URSA组)各30例,空腹抽取静脉血,分离单个核细胞(PBMC),流式细胞术测定pDC细胞比例,q PCR法检测miR-6165表达水平;采用Target Scan生物信息软件,以Target Scan 7. 1程序预测miR-6165与信号传导及转录激活因子3(STAT3) mRNA的3’非翻译区(3’UTR)是否存在潜在结合位点;将293T细胞分为干预组和对照组,分别同时转染miR-6165(空白对照NC)与野生型或突变型STAT3 mRNA 3’UTR荧光素酶报告基因pmir GLO载体,采用双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶报告基因活性。将293T细胞分为3组,过表达组、抑表达组利用Lipofectamine2000转染miR-6165 mimics及inhibitor,空白对照组转染阴性对照引物;转染24 h后收集细胞,分别采用q PCR、Western blotting法检测各组细胞STAT3 mRNA、STAT3总蛋白及磷酸化水平(p-STAT3)。结果与正常妊娠组比较,URSA组PBMC中pDC比例降低而miR-6165表达水平升高(P均<0. 05)。Target Scan 7. 1程序预测显示,miR-6165与STAT3 mRNA的3’UTR之间具有潜在的碱基互补结合位点;荧光素酶报告基因系统检测显示,与对照组比较,干预组能降低野生型STAT3 mRNA 3’UTR荧光素酶报告基因活性(P <0. 05),但对突变型STAT3 mRNA 3’UTR荧光素酶报告基因活性无明显影响(P> 0. 05)。与空白对照组比较,过表达组STAT3 mRNA、STAT3与p-STAT3蛋白表达均降低(P均<0. 05),而抑表达组STAT3 mRNA、STAT3与p-STAT3蛋白表达均升高(P均<0. 05)。结论URSA患者外周血PBMC中pDC比例降低,而miR-6165表达水平升高; miR-6165与STAT3结合并抑制STAT3表达和功能,抑制pDC亚群分化,打破母胎免疫耐受状态进而导致URSA。

• 单位
  生命科学学院; 山东中医药大学附属医院; 济南大学; 山东省医学科学院基础医学研究所; 山东省医学科学院