碱性成纤维细胞生长因子上调促进大鼠肌腱干细胞增殖的机制研究

作者：王成; 曹孝荣^*; 黄哲璟; 王扬剑

来源：浙江医学, 2021, 43(08): 808-917.

• 大鼠肌腱干细胞
• 碱性成纤维细胞生长因子
• 克隆形成
• 分化
• miR-222

目的观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对大鼠肌腱干细胞(TDSC)增殖的影响,并探索其作用机制。方法分离大鼠肌腱,采用植块法获得TDSC,流式细胞术检测TDSC中CD44+且CD14-细胞比例。诱导TDSC分别进行成脂肪、成骨和成软骨细胞分化,并利用油红O、茜素红S和阿尔新蓝染色法对细胞进行鉴定,采用Western blot法检测成脂肪细胞、成骨细胞和成软骨细胞标志蛋白表达水平以验证TDSC的分化能力。采用CCK-8法检测细胞增殖能力,平板克隆形成法检测细胞克隆形成能力。细胞转染实验中,将TDSC分为TDSC组(在完全培养基中培养)、TDSC+bFGF组(培养基中加入1 000μg/L bFGF培养)、TDSC+miR-222 in组(转染miR-222 in后在完全培养基中培养)和TDSC+bFGF+miR-222 in组(转染miR-222 in后在含有1 000μg/L bFGF的培养基中培养)。采用qPCR法检测0、100、500和1 000μg/L bFGF处理后以及转染miR-222 in后TDSC中miR-222表达水平。结果 TDSC中CD44+且CD14-细胞比例为91.83%。TDSC可向成脂肪、成骨和成软骨细胞分化,具有较高水平的阳性结果。bFGF可明显促进细胞增殖,作用第7天时细胞增殖水平达到最大,OD值为0.635±0.036,高于对照组的0.420±0.026,差异有统计学意义(P<0.05);可促进TDSC克隆形成,作用10 d后,bFGF组细胞克隆数为(75±4)个,多于对照组的(50±5)个,差异有统计学意义(P<0.05)。随着bFGF浓度的增加,TDSC中miR-222相对表达量增加(P<0.05),而miR-222 in可明显降低TDSC中miR-222相对表达量(P<0.05)。与TDSC组比较,TDSC+miR-222 in组细胞增殖变慢,而TDSC+bFGF+miR-222 in组在加入bFGF后则可以恢复miR-222 in对细胞的抑制效应。结论植块法能分离到具有分化潜能的大鼠TDSC,bFGF可刺激TDSC增殖,该效应与上调miR-222表达有关。

• 单位
  宁波市第一医院