NF-κB受体激活因子配体的表达及其多克隆抗体的制备

作者：耿抒贤; 刘果; 张娜; 刘旻翾; 燕苗苗; 金丽; 曾巧英^*; 刘光亮^*

来源：中国兽医科学, 2020, 50(04): 473-478.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2020.0056

• 猪RANKL
• 原核表达
• 多克隆抗体

为获取猪源NF-k B受体激活因子配体(RANKL)及其抗体,根据GenBank中猪源RANKL的序列设计引物,将合成的RANKL基因克隆至pMAL-C4x表达载体,转化到大肠杆菌DH5α。经PCR和双酶切鉴定后测序分析,将阳性克隆转化至大肠杆菌BL21后通过IPTG诱导表达。优化表达条件,确定是包涵体表达,蛋白大小为78.1 ku。使用纯化的RANKL为抗原免疫兔制备多克隆抗体。构建重组质粒pCMV-RANKL,表达目的蛋白并使其与多克隆血清反应。经ELISA、Western-blot和IFA鉴定,证实抗RANKL多克隆抗体有良好的抗原特异性,为后续黏膜免疫的研究奠定了基础。

• 单位
  中国农业科学院兰州兽医研究所; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 甘肃农业大学