MTB Hsp16.3重组蛋白通过Fractalkine/CX3CR1信号轴调控小鼠肺泡巨噬细胞M2型极化

作者：卫麟娜; 李茂; 刘利萍; 冯继红; 覃明; 高雪涵; 董品志; 张浪浪; 罗军敏^*

来源：遵义医科大学学报, 2023, 46(11): 1023-1031.

DOI：10.14169/j.cnki.zunyixuebao.2023.0152

• MTB Hsp16.3重组蛋白
• 小鼠肺泡巨噬细胞
• 巨噬细胞极化
• Fractalkine/CX3CR1

目的 初步探讨Fractalkine/CX3CR1信号轴在MTB Hsp16.3重组蛋白诱导小鼠肺泡巨噬细胞向M2型极化中的作用及机制。方法 提取小鼠肺泡巨噬细胞，观察细胞形态后用其特异性标志CD68鉴定；MTB Hsp16.3(100 ng/mL)刺激肺泡巨噬细胞后，采用Real-time qPCR检测TNF-α、Arg-1等极化相关分子mRNA表达水平，Western blot检测Fractalkine、CX3CR1的表达情况。用慢病毒干扰肺泡巨噬细胞CX3CR1的表达后，荧光显微镜观察病毒感染情况；流式细胞术检测感染效率；Real-time qPCR和Western blot检测感染前后肺泡巨噬细胞CX3CR1的表达情况。采用MTB Hsp16.3刺激慢病毒感染过的肺泡巨噬细胞，Real-time qPCR检测各组极化相关分子mRNA表达水平；Western blot检测CD206、Arg-1的蛋白表达情况。利用Western blot检测各组中JNK、p38、ERK的磷酸化水平。结果 显微镜下观察发现新分离的肺泡巨噬细胞为圆形，大小不等，约2 h后贴壁较牢，24 h后，肺泡巨噬细胞呈圆形、梭形等多种形态，且胞体更大，通过CD68鉴定为肺泡巨噬细胞；经MTB Hsp16.3处理后巨噬细胞TGF-β、IL-10、Arg-1、Fizz1的mRNA水平明显增高(P<0.05),巨噬细胞表面Fractalkine、CX3CR1的表达增高(P<0.05),与JNK、p38的磷酸化水平升高(P<0.05)相关。干扰肺泡巨噬细胞CX3CR1的表达后，慢病毒感染效率在72 h达到最高峰，并且可降低巨噬细胞表面CX3CR1的表达。经MTB Hsp16.3刺激慢病毒感染过的肺泡巨噬细胞发现，TGF-β、IL-10、Arg-1、Fizz1 mRNA水平降低(P<0.05),CD206、Arg-1的表达水平降低(P<0.05),与JNK、p38磷酸化水平被抑制(P<0.05)相关。结论 Fractalkine/CX3CR1信号轴可能参与调控MTB Hsp16.3重组蛋白诱导的肺泡巨噬细胞M2型极化，并且可能通过激活JNK、p38的磷酸化水平发挥作用。

• 单位
  基础医学院; 温州医科大学; 丽水市人民医院; 遵义医科大学