串联亲和标签LOX蛋白慢病毒表达载体的构建及在乳腺癌细胞中的表达

作者：刘侠; 刘剑仑; 蒋奕; 唐玮; 杨华伟; 韦薇

来源：现代生物医学进展, 2015, 15(29): 5613-5616.

DOI：10.13241/j.cnki.pmb.2015.29.004

• 串联亲和纯化
• 标签
• 赖氨酰氧化酶
• 慢病毒载体
• 相互作用蛋白质

目的:为了研究赖氨酰氧化酶(Lysyl Oxidase,LOX)及其相互作用蛋白质在乳腺癌中的功能,构建带StrepⅡ/FLAG串联亲和标签的重组LOX蛋白慢病毒表达载体并在乳腺癌细胞MDA-MB-231中表达。方法:设计引物通过聚合酶链式反应获得带StrepⅡ/FLAG串联亲和标签的LOX蛋白(LOX-SF)的亲本质粒,双酶切后鉴定测序克隆至GV303表达载体,连同慢病毒包装质粒共同转染293T得到GV303/LOX-SF慢病毒,将其转染MDA-MB-231细胞,使用荧光定量PCR和蛋白质印迹实验对细胞中重组蛋白LOX-SF进行检测。结果:通过串联亲和纯化获得LOX-SF重组蛋白,使用标签抗体成功鉴定到LOX-SF重组蛋白在MDA-MB-231细胞内稳定表达。结论:GV303/LOX-SF的构建,使带StrepⅡ/FLAG融合标签的LOX蛋白在MDA-MB-231中成功表达及纯化,为筛选和研究LOX及其相互作用蛋白在乳腺癌细胞内的功能奠定了实验基础。

• 单位
  广西医科大学附属肿瘤医院