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摘要
目的建立检测与鉴定布鲁氏菌A19疫苗株基因组DNA的巢式PCR方法。方法通过全基因组序列比较, 分析布鲁氏菌A19疫苗株与其他布鲁氏菌全基因组序列的差异位点, 依据差异位点设计引物, 建立检测与鉴定布鲁氏菌A19疫苗株基因组DNA的巢式PCR方法。提取布鲁氏菌A19疫苗株基因组DNA, 倍比稀释后作为模板DNA, 应用建立的巢式PCR方法进行灵敏性测试;同时, 应用建立的巢式PCR方法检测除布鲁氏菌A19疫苗株之外的其他布鲁氏菌及非布鲁氏菌菌株基因组DNA, 进行特异性测试。结果建立的巢式PCR方法检测布鲁氏菌A19疫苗株基因组DNA最低检出限为3.43 fg, 扩增结果显示, 出现246 bp电泳条带, 其他布鲁氏菌菌株出现314 bp电泳条带, 而非布鲁氏菌菌株均未扩增出电泳条带。结论建立的巢式PCR方法具有灵敏性高、特异性强的特点, 反应体系中存在1个拷贝数的布鲁氏菌A19疫苗株基因组DNA, 即可检测到, 本方法适用于标本中布鲁氏菌A19疫苗株微量基因组DNA的检测与鉴定。
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