鼠疫菌重要调控子蛋白的表达纯化及DNA结合活性分析

作者：罗张; 高鹤; 张义全; 王丽; 谭亚芳; 郭兆彪; 杨瑞馥; 周冬生

来源：生物技术通讯, 2011, 22(04): 468-473.

• 鼠疫耶尔森菌
• 调控蛋白
• DNA结合活性

目的:利用大肠杆菌BL21(λDE3)的表达系统,表达7个有活性的、与鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)传播及致病密切相关的调控子蛋白,并对这些蛋白与DNA的结合活性进行分析,为构建鼠疫菌毒力基因转录调控网络建立分子生化实验平台。方法:通过分子克隆技术构建鼠疫菌调控子蛋白的表达菌株,所得菌株经IPTG诱导后能分别表达鼠疫菌CRP、Fur、PhoP、OxyR、OmpR、RcsB和RovA带His标签的融合蛋白;对这些蛋白与DNA的结合基序进行生物信息学预测;通过体外凝胶迁移实验验证上述蛋白与靶DNA的结合活性。结果:表达了7种有活性的鼠疫菌调控子蛋白,这些蛋白与靶基因启动子区具有体外结合活性。结论:表达的7种调控子蛋白在鼠疫菌的传播致病中有重要作用,这些调控子蛋白与DNA体外结合实验平台的建立,是构建鼠疫菌毒力基因转录调控网络的基础。

• 单位
  中国疾病预防控制中心传染病预防控制所; 传染病预防控制国家重点实验室; 病原微生物生物安全国家重点实验室; 军事医学科学院