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摘要
为建立牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus, BVDV）抗体间接ELISA检测方法，本研究对山东地区规模化奶牛场BVDV主要流行亚型的Erns蛋白进行表位分析，原核可溶表达优势抗原表位片段E■,经Western blot及LC-MS/MS鉴定后作为ELISA包被抗原，对影响ELISA试验的各个因素进行优化，并进行特异性、敏感性、重复性试验等。结果显示，间接ELISA方法优化后的条件为：0.25μg/mL抗原包被37℃2 h后4℃过夜，10%马血清封闭时间1.5 h, 1∶5稀释一抗孵育1.5 h, 1∶8000稀释二抗孵育60 min,显色25 min。该方法特异性、灵敏性及重复性良好，与商品化BVDV抗体检测试剂盒总体符合率为88.04%,符合率良好。本研究建立了一种特异性、灵敏性及重复性良好的BVDV抗体间接ELISA检测方法，为山东地区BVDV防控及临床检测提供了一种有效工具。
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单位青岛农业大学; 中国动物卫生与流行病学中心
