稳定同位素标记氨基酸细胞培养联合质谱绝对定量技术在5、7、55型腺病毒鉴定中的应用

作者：朱文清; 李恒; 张妍; 徐忠伟^*

来源：化学世界, 2023, 64(06): 445-452.

DOI：10.19500/j.cnki.0367-6358.20220402

• 人腺病毒
• 质谱绝对定量技术
• 稳定同位素标记氨基酸细胞培养技术
• 病原体检测

利用稳定同位素标记肽段的质谱绝对定量(AQUA)技术，实现了对5、7和55型人腺病毒的准确鉴定。采用细胞培养条件下稳定同位素代谢标记(SILAC)技术培养细胞至大肠杆菌生长至对数生长期，1 mmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)低温诱导蛋白表达，提取并利用谷胱甘肽S转移酶(GST)纯化富集相应标记的腺病毒六邻体蛋白。通过胶消化分别消化三种不同标记策略(非标记、中度标记和重度标记)的纯化蛋白，消化肽段等量混合脱盐后经纳流液相色谱-串联质谱(Nano HPLC-MS/MS)进行定量蛋白分析。通过SILAC实现大肠杆菌的完整代谢标记，诱导表达腺病毒六邻体蛋白，通过AQUA技术实现对非标记、中度标记、重度标记六邻体蛋白标志性肽段鉴定。成功实现SILAC三种不同标记策略条件下大肠杆菌中5、7、55型人腺病毒六邻体蛋白的完整标记，为5、7、55型人腺病毒感染的快速分型检测提供了新的鉴定策略。