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摘要
目的 了解结核分枝杆菌跨膜蛋白Rv3737对耻垢分枝杆菌感染巨噬细胞自噬的作用。方法 通过PCR扩增结核分枝杆菌Rv3737目的基因，T4连接酶连接Rv3737及穿梭质粒pMV261，构建pMV261-Rv3737，双酶切及测序验证pMV261-Rv3737，通过电转将pMV261-Rv3737及pMV261-Vector电转至耻垢分枝杆菌感受态细胞中以构建过表达Rv3737的耻垢分枝杆菌菌株（MS::pMV261-Rv3737）和对照菌株（MS::pMV261）,PCR及Western blot验证过表达Rv3737的耻垢分枝杆菌菌株。利用分光光度计检测OD600评估过表达Rv3737对耻垢分枝杆菌体外生长的影响。将MS::pMV261-Rv3737及MS::pMV261感染巨噬细胞，通过菌落形成单位（CFU）计数检测耻垢分枝杆菌在巨噬细胞内的存活，用Western blot及激光共聚焦检测自噬相关蛋白LC3II的变化。结果 Rv3737不影响耻垢分枝杆菌的体外生长，但促进耻垢分枝杆菌在巨噬细胞内的存活，过表达Rv3737明显抑制LC3II的表达，激光共聚焦结果显示过表达Rv3737后LC3II自噬点明显减少。结论 结核分枝杆菌跨膜蛋白Rv3737可能通过抑制巨噬细胞自噬来促进耻垢分枝杆菌在巨噬细胞内的存活，有望成为抗结核药物作用的靶点，为结核病的治疗提供一定的理论依据。
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