Tet1蛋白对HEK293T细胞增殖、周期及凋亡的影响

作者：莫晶; 杨红兰; 刘含; 金皎; 范安然; 张鹏; 周艳华^*; 舒莉萍^*

来源：中国比较医学杂志, 2020, 30(06): 69-75.

• 表观遗传
• Tet蛋白
• 细胞周期
• 细胞凋亡
• 细胞增殖

目的构建可诱导Tet1CD过表达的稳转细胞系,探究Tet1蛋白对细胞增殖、周期及凋亡的影响。方法构建重组质粒p TRE-TightTet1CDIRESRFPRPBSAM2rtTAPuro,然后与表达转座酶的"睡美人"质粒通过脂质体法共同转染到HEK 293T细胞,通过嘌呤霉素筛选和多西环素诱导构建诱导表达型的Tet1CD稳转细胞系293T(Tet1CD)。通过Western blot检测Tet1蛋白的表达;通过DNA dot blot检测细胞基因组中5hmC的含量,通过流式细胞术检测Tet1CD蛋白对细胞周期和凋亡的影响;通过细胞计数检测Tet1CD蛋白对细胞增殖的影响。结果成功建立了可诱导Tet1CD过表达的HEK293T细胞系293T(Tet1CD); Western blot结果显示诱导后细胞内Tet1CD蛋白表达上升; DNA dot blot结果显示过表达Tet1CD蛋白细胞内5hmC含量升高;流式细胞术结果显示,Tet1CD过表达促进了细胞凋亡(P<0. 05)及增加G2时期细胞比例(P<0. 05);细胞计数结果显示,Tet1CD过表达抑制细胞增殖(P<0. 0001)。结论 Tet1蛋白可能通过促进细胞凋亡及阻滞细胞周期最终抑制细胞增殖。

• 单位
  贵州医科大学; 中国医学科学院