艾塞那肽通过抑制黄嘌呤氧化酶-活性氧类降低内皮细胞缺氧复氧损伤

作者：王红雷; 韩延辉; 贾静静; 来利红; 朱继红; 董平栓

来源：中华老年多器官疾病杂志, 2017, 16(07): 525-530.

• 黄嘌呤氧化酶
• 活性氧
• 细胞凋亡
• 缺氧复氧损伤
• 心肌微血管内皮细胞

目的探究原代心肌微血管内皮细胞(CMEC)在缺氧复氧损伤(H/R)模型条件下的损伤信号通路,以及艾塞那肽(Exe)的保护机制。方法双酶消化法体外分离培养SD大鼠CMEC,CD31和Ⅷ因子鉴定纯度。建立H/R模型并筛选Exe的最佳干预浓度。Fluo-3AM荧光探针检测H/R条件下胞内Ca2+变化。Western blotting检测黄嘌呤氧化酶(XO)表达量。DCFH-DA标记的活性氧探针检测胞内活性氧类(ROS)水平。共聚焦显微镜观察JC-1染色和细胞色素-C(Cyt-C)释放。予以Exe干预和使用小干扰RNA(siRNA)干扰技术抑制XO的表达,同步观察各指标变化情况。计量资料以均数±标准差(x±s)表示,两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果 10nmol/L为Exe的最佳抗凋亡浓度。H/R导致胞浆内Ca2+荧光强度和Ca2+依赖的XO表达量升高,予以Exe处理可显著降低Ca2+荧光(P<0.05)。予以Exe处理或使用siRNA干扰技术可显著抑制XO的表达、降低XO-ROS生成、降低H/R损伤造成的线粒体膜电位、减少Cyt-C的释放,并伴随caspase-3和caspase-9活性的降低(P<0.05)。结论 H/R通过激活Ca2+-XO-ROS损伤信号通路,导致CMEC的线粒体结构功能障碍,最终诱导细胞凋亡;而予以Exe处理可通过抑制上述信号通路保护CMEC,降低H/R模型引起的细胞凋亡。

• 单位
  河南科技大学第一附属医院