新基因MAGE-n表位肽与人HSP70融合基因的构建及表达纯化

作者：张秀敏; 史琪琪; 李增山; 叶菁; 王军伟; 林慧; 曲萍; 胡沛臻; 隋延仿

来源：中国医药生物技术, 2010, (04): 257-260.

• HSP70热休克蛋白类
• 基因融合
• 癌症疫苗
• MAGE-n
• 表位肽
• 原核表达 Hsp70 Heat-Shock Proteins
• Gene fusion
• Cancer vaccines
• MAGE-n
• Epitope peptide
• Prokaryotic expression

目的构建MAGE-n159-167(QLVFGIEVV)表位肽与人热休克蛋白70(HSP70)的融合基因并表达纯化。方法应用PCR方法,将QLVFGIEVV的cDNA序列融合到人HSP70基因的3'端,将融合基因克隆入原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-28a(+)QLVFGIEVV-HSP70;采用双酶切(Sac Ⅰ、Hind Ⅲ)及PCR鉴定后测序;转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),用IPTG诱导表达,Ni Sepharose6FF亲和填料进行分离纯化,SDS-PAGE检测表达及纯化结果。结果经PCR扩增成功获得约2.0kb的目的片段,重组体经Sac Ⅰ、H...

• 单位
  第四军医大学