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摘要
为了建立一种检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)E2蛋白抗体的阻断ELISA方法，以BVDV-1重组E2蛋白作为包被抗原，辣根过氧化物酶(HRP)标记的BVDV-1 E2蛋白的单克隆抗体作为检测抗体，经过一系列的条件筛选与优化，建立阻断ELISA方法，并对该检测方法的特异性、敏感性和与中和试验结果的符合率进行测定。经优化后的最佳反应条件：抗原包被质量浓度为0.25 mg/L;酶标单抗稀释度为1∶2 000,37℃孵育1 h;待检血清稀释度为1∶8,37℃孵育1.5 h; 37℃避光显色10 min。使用该方法对87份BVDV阴性牛血清进行检测，确定当待检血清的阻断率≤21.13%时，该血清为阴性；阻断率≥26.86%时，该血清为阳性。该方法检测BVDV-2、边界病病毒、猪瘟病毒、牛副流感病毒3型、口蹄疫病毒、布鲁菌、副结核及牛支原体阳性血清均无交叉反应；最低可检出中和效价为8的阳性血清。用该方法检测105份临床血清样品，与血清中和试验总符合率为93.33%,且阻断率与中和抗体效价呈正相关。上述结果表明，本研究建立的阻断ELISA方法特异性好、灵敏度高、操作简便，为BVDV流行病学调查及免疫效果评估提供了一种新的技术手段。
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