蛋白质/多肽片段互补分析法检测alpha-突触核蛋白在细胞中的聚集

作者：郑媛; 渠静; 任晓曦; 郑焱; 杨慧; 张建亮

来源：中国生物化学与分子生物学报, 2016, 32(12): 1374-1378.

DOI：10.13865/j.cnki.cjbmb.2016.12.15

• α-突触核蛋白
• 聚集
• 蛋白质/多肽片段互补分析法
• 荧光素酶

Alpha-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)聚集是引起帕金森病(Parkinson’s disease,PD)发生发展主要原因。本文用蛋白质/多肽片段互补分析法(protein-fragment complementation assays,PCAs)检测α-syn在细胞内的聚集。分别构建融合α-syn与人工改造的荧光素酶human Gaussiaprinceps luciferase(h GLuc)蛋白N端或C端蛋白的质粒,共转入人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞,通过检测酶活性来确定野生型(wild type,WT)及A53T突变体α-syn在细胞中的聚集情况。结果表明WT和A53T突变α-syn都能使荧光素酶活性增强,而且与野生型α-syn相比,突变体A53T的荧光素酶活性更强,说明二者都能聚集,而且A53T聚集程度高于WT。PCAs法具有高灵敏度,不仅能检测α-syn在细胞内的聚集,而且能反映其聚集的程度,为研究帕金森病提供了研究思路和相应药物筛选的有效工具。

• 单位
  基础医学院; 首都医科大学