用小双链RNA抑制转化入HUVEC中绿色荧光蛋白基因的表达

作者：单志新; 林秋雄; 余细勇; 邓春玉; 郑猛; 谭虹虹; 符永恒; 杨敏; 林曙光

来源：中国病理生理杂志, 2006, (02): 262-265.

• RNA干扰
• 绿色荧光蛋白
• 人脐静脉血管内皮细胞
• 脂质体

目的:建立稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),研究小干扰RNA(siR-NA)对HUVECs中GFP表达的抑制作用。方法:用lipofectamine2000将编码GFP的质粒pN3-EGFP转入HUVECs中。用G418筛选并维持已转化pN3-EGFP的HUVEC(HUVEC-GFP)。利用T7RNA转录试剂盒,制备可抑制GFP基因表达的siRNA(GFPsiRNA)和无关对照的RNA(control siRNA)。用oligofectamine将siRNA转入HUVEC-GFP中。继续培养48h后,检测HUVEC-GFP中GFP蛋白和mRNA表达水平。结果:用G418筛选获得了HUVEC-GFP细胞株,可以观察到GFP的稳定表达。HUVEC-GFP转化siRNA后48h,GFP的荧光强度明显下降,而对照组的荧光强度无明显下降。半定量RT-PCR检测显示,GFPsiRNA对GFP mRNA表达有较强的抑制作用,抑制率达40%,而control siRNA对GFP mRNA表达水平无明显的抑制作用。结论:利用体外转录合成的siRNA能有效地抑制HUVECs中GFP的表达。

• 单位
  广东省人民医院