LRRC4多抗制备及在构建不同级别脑胶质瘤差异表达中的应用

作者：李丹; 武明花; 陈琼; 黄河; 黄琛; 李伟松; 李小玲; 李桂源

来源：中南大学学报(医学版), 2007, (03): 373-379.

DOI：10.3321/j.issn:1672-7347.2007.03.003

• LRRC4
• 多克隆抗体
• 脑胶质瘤
• 病理分级

目的:制备兔抗脑瘤候选抑瘤基因LRRC4(leucine-rich repeats containing 4)的多克隆抗体,应用该抗体检测LRRC4表达与脑胶质瘤病理分级的相关性。方法:应用DSGene1.1软件分析LRRC4全长蛋白,避开跨膜结构域,选取亲水性及抗原性均好的蛋白序列。构建相应的融合表达载体pGEX-4T-2/276bp,转入E.coliJM109中IPTG诱导表达。融合蛋白经纯化后免疫新西兰兔,收集并纯化抗血清,获得兔抗人LRRC4多抗,应用该抗体通过Western印迹和免疫组织化学检测LRRC4在正常人胚胎各器官组织中的表达及其在正常脑组织与各级脑胶质瘤中的表达差异。结果:制备了效价高、特异性好的兔抗人LRRC4多抗,进一步证实了LRRC4在正常人脑组织中相对特异高表达,在脑胶质瘤中表达下调(22例/37例)或缺失(15例/37例),其表达水平与脑胶质瘤的病理分级相关。结论:兔抗人LRRC4多抗效价高、特异性好,应用该抗体检测到LRRC4的表达水平与脑胶质瘤病理分级密切相关,为LRRC4后续的研究工作奠定了基础。

• 单位
  中南大学