NF-Y调控KLF4转录对乳腺癌细胞增殖、迁移的影响

作者：曹晓智; 高恬媛; 汪俊茹; 张根葆

来源：山东医药, 2019, 59(31): 9-13.

• 乳腺癌
• 核因子Y
• Kruppel样因子4
• 细胞增殖
• 细胞迁移

目的探讨核因子Y(NF-Y)调控Kruppel样因子4(KLF4)转录对乳腺癌细胞增殖、迁移的影响。方法从TCGA数据库中下载乳腺癌的RNA-seq数据集,调取乳腺癌组织NF-Y、KLF4 mRNA表达数据,并分析二者的相关性。选择乳腺癌MCF-7细胞,分别采用shNF-Y#1、shNF-Y#2、shCON慢病毒沉默NF-Y表达,检测其NF-Y、KLF4 mRNA和蛋白表达,采用5-溴-2-脱氧尿嘧啶(EdU)插入法和磺酰罗丹明B(SRB)实验检测细胞增殖能力,采用划痕实验检测细胞迁移能力。采用染色质免疫共沉淀(ChIP)实验验证NF-Y能够结合到KLF4启动子上,采用双荧光素酶报告基因实验验证NF-Y能够激活KLF4启动子。结果 Pearson相关分析显示,乳腺癌组织NF-Y mRNA表达与KLF4 mRNA表达呈正相关关系(P<0.05)。MCF-7-shNF-Y#1、MCF-7-shNF-Y#2细胞NF-Y、KLF4 mRNA和蛋白表达均低于MCF-7-shCON细胞(P均<0.05),而MCF-7-shNF-Y#1细胞与MCF-7-shNF-Y#2细胞比较P均>0.05。EdU插入法、SRB实验和划痕实验结果显示,MCF-7-shNF-Y#1、MCF-7-shNF-Y#2细胞增殖和迁移能力均低于MCF-7-shCON细胞(P均<0.05),而MCF-7-shNF-Y#1细胞与MCF-7-shNF-Y#2细胞比较P均>0.05。ChIP实验结果显示,Input组、Histone3组、Sp1组、NF-Y组均检测到相应的PCR产物,而IgG组未检测到相应的PCR产物。双荧光素酶报告基因实验结果显示,荧光素酶活性PGL3-Basic+NF-Y组高于PGL3-Basic+vector组,PGL3-KLF4p+NF-Y组高于PGL3-KLF4p+vector组,PGL3-KLF4p+NF-Y组高于PGL3-Basic+NF-Y组(P均<0.05);PGL3-Basic+vector组与PGL3-KLF4p+vector组荧光素酶活性比较P>0.05。结论 NF-Y能够通过调控KLF4转录促进乳腺癌细胞的增殖和迁移。

• 单位
  皖南医学院; 皖南医学院第二附属医院