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摘要
目的研究蛇床子素对人鼻咽癌CNE2细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响,并探讨其调节CNE2细胞上皮间质转化(EMT)的分子机制。方法体外培养CNE2细胞,以0、20、40、80μg/ml蛇床子素分别处理CNE2细胞24、48 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、Transwell实验分别检测其对细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响,以0μg/ml蛇床子素处理组为对照组。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blotting方法分别检测EMT标志物上皮钙黏着蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)及Wnt/β-catenin信号通路组分β-catenin、细胞周期蛋白D1 (cyclin D1)的转录和蛋白表达水平。结果作用24 h和48 h后,0、20、40、80μg/ml蛇床子素处理组细胞增殖抑制率分别为0.00%±0.00%、7.45%±0.87%、14.12%±2.29%、27.26%±0.43%和0.00%±0.000%、13.44%±0.84%、29.03%±0.78%、57.49%±1.70%,差异均有统计学意义(F=174. 33,P<0. 001; F=1 041. 40,P <0.001),进一步两两比较,差异均具有统计学意义(均P<0.01)。采用不同浓度的蛇床子素(0、20、40、80μg/ml)处理CNE2细胞48 h后,细胞迁移细胞数分别为52.13±4. 49、29. 00±4. 49、18. 50±1. 93、13. 75±2. 77,差异有统计学意义(F=200. 37,P <0. 001),进一步两两比较,差异均具有统计学意义(均P <0.01)。采用不同浓度的蛇床子素(0、20、40、80μg/ml)处理CNE2细胞48h后,细胞侵袭数分别为46.63±2.87、24.13±2.87、16.75±5.29、11.00±1.77,差异有统计学意义(F=131.92,P<0.001),进一步两两比较,差异均具有统计学意义(均P<0.01)。采用不同浓度的蛇床子素(0、20、40、80μg/ml)作用于人鼻咽癌CNE2细胞48 h后,E-cadherin mRNA(1.00±0. 13、2.61±0.03、3. 12±0.09、3.60±0.06;F=20.92,P<0.001)和E-cadherin蛋白表达(0.22±0.03、0.35±0.01、0.60±0.04、0.82±0.03;F=178. 63,P <0.001)差异有统计学意义,进一步两两比较,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。同时,采用不同浓度蛇床子素(0、20、40、80μg/ml)处理CNE2细胞48 h后,vimentin的mRNA表达(1.00±0.12、0.68±0.03、0. 56±0. 01、0.40±0. 09;F=9. 48,P <0.010)、β-catenin的mRNA表达(1.00±0. 14、0.78±0. 04、0.69±0. 07、0. 46±0. 12; F=4. 84,P <0. 050)和cyclin D1的mRNA表达(1.00±0. 09、0. 82±0.03、0. 58±0.09、0. 40±0.03;F=9.49,P <0.010)差异均有统计学意义,各组间进一步两两比较,差异均有统计学意义(均P <0.05); vimentin的蛋白表达(0. 85±0. 02、0. 74±0. 01、0. 34±0. 01、0.27±0.01;F=610. 58,P<0. 001)、β-catenin的蛋白表达(0. 83±0. 00、0. 44±0. 02、0. 39±0. 00、0.23±0.03;F=985.74,P<0.001)、cyclin D1的蛋白表达(0. 86±0. 02、0. 67±0. 00、0. 35±0.01、0.25±0.01; F=910. 57, P <0.001)差异均有统计学意义,各组间进一步两两比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论蛇床子素可抑制CNE2细胞的增殖、侵袭和迁移,其机制可能与调节Wnt/β-catenin信号通路进而抑制EMT过程有关。
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