血管基膜衍生多功能肽的表达及其生物活性的鉴定

作者：戴文建; 张曼; 彭淑平; 曹建国

来源：中国肿瘤生物治疗杂志, 2006, 13(06): 423-428.

DOI：10.3872/j.issn.1007-385X.2006.06.005

• 血管基膜衍生多功能肽
• 抗肿瘤
• 血管形成抑制剂
• 血管基底膜
• 内皮细胞血管化

目的在毕赤酵母中表达血管基膜衍生多功能肽(vascularbasementmembrane-derivedmulifunctionalpeptide,VB-MDMP),并鉴定其生物学活性。方法利用PCR技术获得融合了谷胱甘肽转移酶(GST)的肿瘤抑素(tumstatin)活性成分的GST-VBMDMP基因,克隆到pPIC9K载体;然后原生质体转化法转化毕赤酵母细胞,行多克隆筛选和表型鉴定。获得His+Muts表型的转化子,在MGY培养液中30℃摇床培养,每24h从培养液中转移1ml培养液上清于-70℃保存,并保持培养瓶中培养液的量和培养液中甲醇0.5%的浓度不变,第9天行SDS-PAGE检测表达的蛋白并纯化,然后进行细胞和动物生物活性检测。结果SDS-PAGE发现阳性重组子在MGY培养液中表达的蛋白量在1~7d逐渐增加,到第8天后开始减少,用GlutathioneSepharose4B亲和层析柱纯化获得GST-VBMDMP融合蛋白;GST-VBMDMP能抑制C57BL/6鼠动脉内皮细胞管状结构的形成;同时GST-VBMDMP(2、6、10mg/kg)对小鼠Lewis肺癌原发瘤(瘤重抑制率分别为96.6%、82.1%、61.2%)和自发性肺转移瘤(瘤结节抑制率分别为96.8%、87.9%、75.3%)均具有明显的抑制作用(P<0.01)。结论VBMDMP能够抑制鼠动脉内皮细胞管状结构的形成,并对小鼠Lewis肺癌原发瘤和肺转移具有明显的抑制作用。

• 单位
  中南大学; 湖南环境生物职业技术学院; 南华大学