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摘要
为了获得具有良好抗原性的牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）重组gE蛋白，本研究采用PCR方法扩增全长gE基因，并在其5'端引入蜂素信号肽（HBM）以增加表达蛋白的分泌，将其克隆至pFastBac1供体质粒中，构建重组质粒pFB-gE。将测序正确的p FB-gE转化至DH10Bac感受态细胞中获得重组杆粒（rBacmid-gE），经PCR鉴定后将阳性r Bacmid-gE转染Sf21细胞，获得重组杆状病毒（rBV）。对不同代次的rBV进行PCR鉴定，结果表明获得了整合gE基因的r BV，且能稳定传代。间接免疫荧光试验（IFA）结果显示，接种rBV的Sf21细胞与gE抗体阳性牛血清反应后出现绿色荧光，而与阴性牛血清不反应，表明g E基因在rBV中获得正确表达。大量培养rBV，收获培养上清液，对重组gE蛋白（rgE）纯化，纯化后的rgE浓度为0.78 mg/mL。对纯化后的rgE进行western blot检测，结果显示，rgE能与g E抗体阳性兔血清和羊血清反应，与IBRV-56(g E基因缺失株)免疫兔血清和健康羊血清均不反应，表明rgE具有较强的反应原性。采用rgE对4只小鼠进行两次免疫，通过间接ELISA方法检测小鼠血清抗体，结果显示，rgE可诱导小鼠产生特异性抗体，表明rgE具有良好免疫原性。本研究为IBRV gE蛋白结构和功能的研究奠定了一定基础，为gE基因缺失疫苗免疫牛与自然感染牛的鉴别诊断提供了物质基础。
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单位兽医生物技术国家重点实验室; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
