结核分枝杆菌甲硫氨酰tRNA合成酶与底物及其类似物的结合比较

作者：王炜; 任伟宏; 陈明心; 蒋露; 张岱; 陈磊

来源：中国人兽共患病学报, 2021, 37(04): 317-322.

DOI：10.3969/j.issn.1002-2694.2021.00.042

• 结核分枝杆菌
• 甲硫氨酰tRNA合成酶
• 配体结合分析

目的建立重组结核分枝杆菌甲硫氨酰tRNA合成酶(MetRS)的制备方法,分析底物及其类似物与重组蛋白的结合能力。方法将结核分枝杆菌MetRS(MtMetRS)基因置于不同启动子调控之下。通过表达筛选选择重组蛋白大量制备的条件,使用分子筛制备重组蛋白,并验证其分子量。使用Thermal Shift Assay比较MetRS底物及其类似物与重组结核分枝杆菌MetRS的结合能力。结果通过不同重组质粒的表达筛选,确定重组蛋白制备方法。Thermal Shift Assay分析提示甲硫基腺苷酸(methionyl-adenylate, MetAde)与焦磷酸同时存在时可以提高重组蛋白的热稳定性。结论成功制备出具有天然活性的重组MtMetRS蛋白;应以甲硫基腺苷酸和焦磷酸分子结构为方向,设计、筛选结核分枝杆菌MetRS抑制剂。

• 单位
  中国医学科学院病原生物学研究所; 河南中医药大学