实时荧光多酶恒温扩增技术检测小鼠细小病毒核酸的方法建立

作者：尤金炜; 陈慧; 马畅; 张旭亮; 董敏; 杨阳; 恽时锋^*

来源：东南国防医药, 2023, 25(03): 225-229.

• 小鼠细小病毒
• 多酶恒温扩增技术
• 实时荧光
• 快速检测

目的 旨在建立基于实时荧光多酶恒温扩增(exo-MIRA)技术的小鼠细小病毒(MVM)核酸检测新方法。方法 收集2021年1月至2022年1月南京大学医学院附属金陵医院实验动物室共75份小鼠肠道内容物标本。针对MVM VP2基因的保守区域设计4对引物，琼脂糖凝胶电泳分析扩增产物以筛选最优引物对，并设计特异性荧光探针，构建exo-MIRA检测法。通过检测梯度稀释模拟样本，进行检出限评价。检测其他小鼠病毒，包括仙台病毒(SV)、小鼠肝炎病毒(MHV)、小鼠鼠痘病毒(Ect)、小鼠肺炎病毒(PVM)、呼肠孤病毒(Reo),分析exo-MIRA法的交叉反应性。采用qPCR法和exo-MIRA法同时检测收集的75份标本，统计分析两种方法的一致性。以qPCR法为参比方法，评估该法的敏感度和特异度，进行诊断效能评价。结果 采用exo-MIRA技术建立MVM核酸检测方法，该方法检测MVM的检出限为10 copies/μL,且与其他五种小鼠病毒无交叉反应，可特异性检出MVM。75份标本检出结果显示，exo-MIRA法和qPCR法高度一致，Kappa值为0.921(P<0.05),exo-MIRA法的敏感度为100.0%,特异度为96.7%。结论 建立了一种基于实时荧光MIRA恒温扩增技术的MVM核酸检测方法，具有简单快速、实验要求低、敏感特异等优点。该方法可应用于现场复杂环境的即时检测，在实验动物质量检测应用上有一定前景。

• 单位
  南京大学; 南京市第二医院