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摘要
目的了解转录因子ETS-1介导亚砷酸钠(NaAsO2)对人正常肝细胞L-02的微小RNA(miRNA,miR)-21表达的影响。方法量-效关系研究:采用不同剂量NaAsO2[0.0(对照)、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0μmol/L]作用L-02细胞24h(n=6)。时-效关系研究:采用0(对照)、20μmol/LNaAsO2作用L-02细胞12、24、36、48h(n=6)。分别采用ETS-1短发夹RNA(shRNA)和miR-21 inhibitor对ETS-1和miR-21的表达进行干预。ETS-1 shRNA(100nmol/L)处理分为4组:①ETS-1 shRNA对照(NC)处理组;②ETS-1 shRNA NC联合NaAsO2(20μmol/L)处理组;③ETS-1 shRNA处理组;④ETS-1 shRNA联合NaAsO2(20μmol/L)处理组。miR-21 inhibitor(100nmol/L)处理分为4组:①miR-21 inhibitor NC处理组;②miR-21 inhibitor NC联合NaAsO2(20μmol/L)处理组;③miR-21inhibitor处理组;④miR-21 inhibitor联合NaAsO2(20μmol/L)处理组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组L-02细胞ETS-1 mRNA、miR-21表达;蛋白免疫印迹法检测ETS-1蛋白表达。结果量-效关系研究:0.0(对照)、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0μmol/L组ETS-1 mRNA表达分别为1.008±0.028、1.552±0.029、1.697±0.050、1.842±0.077、2.233±0.096、2.235±0.092;miR-21表达分别为1.025±0.094、1.552±0.072、1.683±0.066、1.915±0.171、2.337±0.195、2.592±0.177;ETS-1蛋白表达分别为1.060±0.045、1.267±0.160、1.386±0.087、1.723±0.196、2.208±0.122、2.284±0.224,组间比较差异有统计学意义(F=47.797、8.959、65.748,P均<0.05),其中各染砷组均明显高于对照组(P均<0.05),且呈剂量-效应关系。时-效关系研究:染砷L-02细胞12、24、36、48 h时ETS-1 mRNA表达分别为1.253±0.175、1.623±0.220、1.771±0.324、1.913±0.251;miR-21表达分别为1.502±0.111、1.716±0.113、1.979±0.186、2.452±0.304;ETS-1蛋白表达分别为1.196±0.105、1.502±0.076、1.651±0.074、1.839±0.139,组间比较差异有统计学意义(F=14.936、39.180、39.441,P均<0.05),其中各时间染砷组均明显高于相同时间点对照组(1.044±0.115、1.044±0.124、1.108±0.088、1.053±0.061;1.092±0.061、1.096±0.169、1.024±0.111、1.057±0.146;1.020±0.017、1.049±0.121、1.024±0.089、1.031±0.124,P均<0.05),呈时间-效应关系。ETS-1 shRNA联合NaAsO2处理组与ETS-1 shRNA NC联合NaAsO2处理组比较,ETS-1 mRNA和miR-21表达明显下调(0.912±0.238比1.641±0.225,1.313±0.334比2.363±0.252,P均<0.05);miR-21 inhibitor联合NaAsO2处理组与miR-21 inhibitor NC联合NaAsO2处理组比较,ETS-1mRNA表达(1.580±0.077比1.576±0.065)差异无统计学意义(P>0.05)。结论 L-02细胞中ETS-1、miR-21可应答NaAsO2暴露呈高表达状态,ETS-1介导了NaAsO2引起的miR-21高表达,可能是砷致人肝脏miRNAs表达改变及肝损伤的重要分子机制之一。
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