中华绒螯蟹血细胞的原代培养及其管家基因检测

作者：杨鹤; **成; 侯鑫; 王军; 陈晓雯; 吴嘉敏^*; 王成辉^*

来源：农业生物技术学报, 2019, 27(09): 1703-1710.

• 中华绒螯蟹
• 细胞培养
• 渗透压
• 血清浓度
• 基因表达

水生甲壳动物血细胞的离体培养已在多种甲壳动物中得到了初步研究,但不同学者在培养基种类、血清浓度和渗透压等关键培养条件的研究中并未达成广泛共识。为探索中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)血细胞原代培养所需的适宜培养基和关键培养条件,为后续相关功能基因研究提供基础。本研究分析了5种培养基(1×L-15, 2×L-15, 3×L-15, Sf-900和TC-100培养基)、5个渗透压条件(345, 569, 803,991和1215 m Osm/kg)和5个血清浓度(0%, 5%, 10%, 15%和20%)对中华绒螯蟹血细胞的体外培养效果,并检测了培养细胞的基因表达情况。结果发现:TC-100培养基培养的中华绒螯蟹血细胞形态最佳,存活率最高;以TC-100培养基为基础培养基,筛选出渗透压为991 mOsm/kg和不添加胎牛血清(0%)时培养的细胞形态更好,培养至10 d的成活率仍在50%以上;泛素结合酶E2b基因(ubiquitin-conjugating enzyme E2b, UBE)、泛素/核糖体S27融合蛋白基因(ubiquitin/ribosomal S27 fusion protein, S27)和β-actin共3个管家基因在血细胞培养过程中(0～10 d)均稳定表达。结果表明,本研究筛选的培养基及关键培养条件能更好地培养中华绒螯蟹血细胞,培养的细胞能进行初步的基因功能实验,本研究为中华绒螯蟹基因功能研究提供新的技术手段。

• 单位
  上海海洋大学; 农业部