REV囊膜蛋白的原核表达、抗体制备及鉴定

作者：朱丽霖; 王后坤; 陈雪阳; 高可丽; 方春; 梁雄燕; 杨玉莹^*

来源：江西农业大学学报, 2021, 43(05): 1159-1166.

DOI：10.13836/j.jjau.2021125

• 禽网状内皮增生症病毒
• 原核表达
• 囊膜蛋白
• 多克隆抗体

【目的】禽网状内皮增生症病毒(reticuloendothelial virus,REV)囊膜蛋白与细胞表面受体结合启动病毒感染,并在REV的复制、致病过程中具有重要作用。为探索REV囊膜蛋白相关生物学特性,研究获得了高效表达的禽网状内皮增生症病毒囊膜蛋白,制备多克隆抗体。【方法】利用原核表达载体pET-28a和pGEX-6p-1表达REV囊膜蛋白gp90,并通过Ni2+亲和层析柱对融合蛋白REV-His-gp90进行纯化,纯化的蛋白免疫Balb/c小鼠,制备了多克隆抗体;纯化的REV-GST-gp90蛋白用于检测多克隆抗体效价。【结果】pET-28a-REV-gp90和pGEX-6p-1-REV-gp90表达质粒构建成功,通过SDS-PAGE验证蛋白能在大肠杆菌BL21菌株中表达;Western-blot检测结果显示制备的多克隆抗体具有良好的反应性和特异性;采用间接ELISA法检测抗血清效价为1∶64 000;IFA结果显示,制备的多克隆血清能与REV特异性反应。【结论】研究制备的多克隆抗体效价高、特异性良好,为进一步开展REV囊膜蛋白的生物学特性研究及其特异性抗体应用奠定基础。

• 单位
  动物科学学院; 长江大学